毒理学试验是评价微生物肥料质量安全的重要试验方法，也是对其菌种安全性分级的重要判定试验。微生物肥料因为属于含有特定微生物活体的肥料产品， 里面的微生物活体大多都是一些细菌、真菌、放线菌等，所以无论在生产还是储运、施用等环节，都存在一定的不安全因素。由于微生物肥料相关的国家权威标准不完善，不少生产用菌种分类地位不明确，甚至混乱，加上企业技术人员在操作上可能导致生产菌株污染，某些致病菌或病原菌流入生产，最终导致其产品存在潜在危害性，安全评价就成为把控微生物肥料重要方式之一。

    微生物肥料的安全评价通常会委托第三方检测机构去测定。检验机构通常需要对菌种和产品两方面进行设计检测方案。其中菌种要进行多项分类鉴定，包括名称确认，生理、形态、特性等鉴定，功能评价。菌种安全评价最重要就是根据产品所含菌种的鉴定信息，按照菌种分级管理目录，确定菌种安全级别和应做的毒理学试验及毒理学检测项目。对于微生物肥料产品则是需要先根据对应的检测标准，进行产品技术指标检测，如果符合检测标准，并在载体物料的真实性确认后，再设计毒理试验检测方案。

    菌种毒理学试验介绍

    菌种是微生物肥料产品的技术核心，根据现有的行业标准NY/T 1109-2017《 微生物肥料生物安全通用技术准则》，菌种安全等级分为四个等级，分别为：第一级为免做毒理学试验的菌种；第二级为需做急性经口毒性试验的菌种；第三级为需做致病性试验的菌种；第四级为禁用菌种。对于需要做毒理学试验的菌种，生产者需提供试验用纯菌种斜面，经复核确认与该菌种鉴定资料相符且无杂菌污染后，才能进行毒理学试验；对于为免做毒理学试验的菌种的生产菌株，也需要通过分析和确定该菌株的基因组中是否存在毒素、溶血素、抗生素等具安全风险的基因及基因族结构，评估其产生有毒有害物质的可能性及其安全风险。

    产品毒理学试验介绍

    产品毒理学试验一个重要参考指标就是半数致死量（LD50）。微生物肥料产品从大类上可以分为农用微生物菌剂、复合微生物肥料、生物有机肥和农用微生物浓缩 制剂四大类产品。像农用微生物菌剂又可细分为九类产品，主要为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微 生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根 菌剂、生物修复菌剂。这也就要求检验机构需要针对不同的微生物肥料产品、类型及其剂型，进行不同的安全性评价策略。比如复合微生物肥料、生物有机肥和液体剂型微生物菌剂等产品需做急性经口毒性试验； 除有机物料腐熟剂以外的固体微生物菌剂类产品均免做毒理学试验；对于使用芽孢杆菌和类芽孢杆菌部分菌株存在的微生物肥料必须做溶血试验。

    毒理学试验设计

    严格来讲毒理学试验一个完整的系列毒性试验程序，应包括对受试物进行各种毒性作用检测的一系列试验。那么微生物肥料的毒理学试验有哪些呢？（1）急性经口毒性试验；（2）致病性试验；（3）抗菌药物敏感试验；（4）急性腹腔注射致病性试验；（5） 急性眼刺激试验。微生物肥料毒性实验程序一般都是分阶段进行，试验的原则为: 由急性毒性试验到亚急性毒性试验或亚慢性毒性试验，最后为慢性毒性试验；由一般毒性试验到特殊毒性试验；或根据受试物与人接触的密切程度、接触方式，有重点地增减某些项目等。

    我们以致病性试验设计方案为例，首先应该做急性经口毒性试验，然后做一次性破损皮肤刺激试验来检测受试物对试验动物皮肤的刺激或腐蚀作用和强度，接着就是做溶血试验，检测受试物是否具有溶血特性。抗菌药物敏感试验也要做，主要检测受试物对抗菌药物的敏感性强度；急性腹腔注射致病性试验是用来检测受试物的急性致病性的；急性眼刺激试验则是检测受试物对试验动物眼睛的急性刺激和腐蚀作用。这里我们需要知道的是，这些毒理试验是按程序一个一个来做的，只有上一个试验通过试验，方可进行下一个。只要不通过，则下面的试验都会被提前终止。检测结果就是不符合要求，产品不能生产和销售。

    其实微生物肥料除了毒理学试验外，技术指标还可以检测有效活菌数、杂菌率、重金属、总养分、有机质、理化指标、卫生学 指标等，有毒有害物质还可以检测重金属、缩二脲等限量，还有载体物料也需要进行真实性确认，而且确认后才可以进行毒理学试验。这些年随着菌种使用范围扩宽，菌种新品种不断出现，包括国外研究机构也明确提出了微生物肥料生物安全性存在的风险程度，进行毒理学试验，可以对微生物肥料行业形成完善安全评估体系和监督管理手段，从而保证生产者、使用者以及环境的三方安全，同时对于建立微生物肥料产业的风险预警和应急反应机制，具有重要意义。